地佐辛外用制剂的体外透皮特性比较

2020-03-20

地佐辛(dezocine1) 是新型桥环氨基四氢萘,是苯吗啡烷类衍生物,通过激动分布于大脑、脑干及脊髓的κ 受体产生镇痛作用;同时部分拮抗μ 受体,使其胃肠道不良反应少、呼吸抑制作用小、成瘾性低、安全性高。1 常用于术中、术后镇痛,其镇痛强度、起效时间和持续时间与经典阿片类药物吗啡相当。此外,它还可以预防麻醉药异丙酚引起的注射疼痛,效果与常用药利多卡因相似,但却更安全、更有助于提高异丙酚的稳定性。

目前1 上市产品只有注射液,使用不便、胃肠道不良反应较多,且大多发生在用药中、短期内,因此需要控制静脉滴速,时刻监视患者的临床情况。据文献报道,1 基础镇痛量为5 9 ng/ml,超过45 ng/ml 时开始出现不良反应。因1 起效浓度低、治疗窗窄,适用于制成外用制剂,不仅能实现缓释、减轻不良反应,而且使用方便,可随时中止用药。本试验对3 种不同的自制外用制剂进行不同皮肤上的体外透皮特性比较,探究皮肤对药物筛选及剂型的影响,并为1 外用制剂的开发提供更多的参考。

1 仪器与试药

LC-20A 型高效液相色谱仪( 日本Shimadzu 公司) TK-20B 型透皮扩散仪( 垂直式,上海锴凯科技贸易有限公司) ? 型透皮贴片涂布机( 药物制剂国家工程研究中心) 5424R 型高速冷冻离心机( 德国Eppendorf 公司)

1 原料药( 扬子江药业集团, 含量99 %, 批号R14091601-1) ;丙烯酸酯压敏胶( 德国Henkel 公司,型号Duro-Tak 87-2510Duro-Tak 7-4302) ;羟丙纤维素(HP,上海森君化工制剂辅料有限公司) ;甘油( 湖南尔康制药股份有限公司) ;肉豆蔻酸异丙酯( IPM,日本关东化学株式会社);月桂氮酮( 福建寿宁美菲思生物化学品厂);甲醇( 色谱纯,Merck 公司) ;纯净水( 杭州哇哈哈集团有限公司) ;磷酸二氢钾、氢氧化钠、三乙胺、磷酸、乙酸乙酯( 国药集团化学试剂有限公司)

SD 大鼠( 雌性,约20 g,上海市西普尔- 必凯实验动物有限公司,动物合格证编号20130016005182) ;巴马小香猪(2 周龄,雄性,上海甲干生物科技有限公司,动物合格证编号2010002803777)

2 方法与结果

2.1 制剂的制备

贴片:以IPM 为促渗剂,设计含药量为5%的处方。先将1 溶解于一定量乙酸乙酯中,加入相应量压敏胶(Duro-Tak 87-2510 Duro-Tak 7-4302 按一定比例混合后使用),搅拌均匀并静置脱气。然后将涂布机升温至85 ℃,调整涂布厚度进行涂布,并用模具切割成1.58 cm×1.58 cm( 面积为2.5 cm2)的正方形贴片( 含药量1 mg/cm2)

凝胶:取适量水作为溶剂,加入5%甘油做保湿剂、5%月桂氮酮作促渗剂,然后加入1 的无水乙醇溶液,最后加入2 HP 溶液,溶胀过夜,搅拌均匀,即得含药量2%的凝胶。

溶液:将1 溶于适量无水乙醇中,加入水、5%甘油( 保湿剂),搅拌均匀,使含药量为2%。

2.2 皮肤的处理

SD 大鼠皮肤:剃除SD 大鼠背部皮肤毛发,涂抹脱毛膏,5 min 后洗净。24 h 后取下脱毛的背部皮肤,除掉皮下毛细血管和脂肪组织,用铝箔包好,置-20 ℃冰箱中保存。使用前需放至室温,生理盐水洗净,肉眼观察无破损即可进行试验。

新生猪皮:将巴马小香猪脱去毛发,取下的背部皮肤须除掉皮下毛细血管和脂肪组织,用铝箔包好,置-20 ℃冰箱中保存。使用前需放至室温,生理盐水洗净,肉眼观察无破损即可进行试验。

2.3 体外分析方法的建立

2.3.1 溶液配制

对照品溶液:精密称取1 原料药 10.65 mg,置10 ml 量瓶中,加入少量甲醇,超声溶解,用甲醇定容,摇匀,配制得到1 065 μg/ml 的贮备液,置4 ℃冰箱密封避光保存。临用前放至室温,精密量取贮备液1 ml 50 ml 量瓶中,加入甲醇∶三乙胺(1 1) 定容,得到21.3 μg/ml 对照品溶液。

2.3.2 色谱条件

色谱柱 XTerra® RP18 (4.6 mm×150 mm5 μm) ;流动相 pH 3.0 三乙胺∶甲醇(65 35) ;检测波长 282 nm ;流速 1.0 ml/min ;柱温 40 ;进样量 20 μl

2.3.3 专属性试验

pH 6.8 磷酸盐缓冲液[PBS,根据《中华人民共和国药典》(ChP)2015 年版四部通则配制]、空白猪皮肤浸出液、空白大鼠皮肤浸出液、1 对照品溶液、8 h 体外透鼠皮样品,照“2.3.2”项下条件进样测定。色谱图见图1。结果表明1 的保留时间均为5.3 min,说明皮肤中内源性物质对测定无干扰,该方法专属性较强。

2.3.4 线性范围与定量限

精密移取1 贮备液适量,用pH 6.8 PBS 逐级稀释,配制成浓度分别为0.130.802.6613.3153.25133.10266.20 532.50 μg/ml 的线性对照品溶液。照“2.3.2”项下条件进样测定,记录色谱图,以峰面积(A) 为纵坐标,浓度( c) 为横坐标,进行线性回归分析,得标准曲线方程为A=12 036c-1 023.3r=0.999 8。说明1 浓度在0.13 532.50 μg/ml范围内线性良好。本法定量限为99.8 ng/ml(S/N 10)

2.3.5 回收率试验

分别精密量取1 贮备液,加入空白皮肤的24 h浸出液,稀释成低、中、高浓度(2.66133.10532.50 μg/ml) 的样品溶液,各3 份。分别离心,取上清液,照“2.3.2”项下条件进样测定,计算得1平均回收率为100.2%,RSD 2.01 (n=9),证明该法能准确测定1 的累积透皮量,方法可行。

2.4 体外透皮试验

2.4.1 试验方案

采用Franz 立式透皮扩散池进行体外透皮试验,水浴温度32 ℃、搅拌速度200 r/min,接收池体积8.0 ml,有效透过面积为3.14 cm2,接收介质为pH 6.8 PBS。揭去贴片防黏层,使其与皮肤紧密接触,固定于接收池上;将凝胶均匀涂布于供给池内皮肤上;溶液均匀倾倒于供给池内( 给药量均为2.5 mg) ;分别于0.51246824 h 取样0.3 ml( 及时补加同温等量介质),离心(13 523.2×g)3 min,取上清液进样分析。

2.4.2 试验结果

根据标准曲线计算各采样点样品中的药物浓度,照下式计算单位面积累积透过量(Q)

式中,cn 为第n 个时间点测得的浓度;ci 为第i 个时间点测得的浓度;A 为有效透皮面积(3.14 cm2)。绘制Q-t 曲线,对曲线中直线部分进行线性拟合,所得的斜率即为稳态透过速率JS,与X 轴的截距即为时滞tL,结果见表1 和图2

2.5 统计分析结果

对不同组的累积透皮量和稳态透过速率分别用GraphPad 6.0 软件的two-way ANOVA 检验和Linearregression 做显著性分析。首先比较同一剂型条件下2 种皮肤对1 透过性能的影响,其次比较同种皮肤条件下1 不同剂型的差异性。结果表明,在设置显著性水平α=0.05 的条件下,同一剂型( 贴片、凝胶、溶液) 的累积透皮量和稳态透过速率在大鼠皮肤和乳猪皮肤间有显著差异(P<0.05)。对于同种皮肤、不同剂型的累积透皮量和稳态透过速率的统计学分析结果则见表2

3 讨论

3.1 皮肤的影响

由“2.5”项下的统计结果可见,对同一剂型,鼠皮和猪皮的累积透皮量和稳态透过速率均有显著性差异,结合图2 可知:大鼠皮肤通透性比猪皮好,药物的累积透皮量高,则其对不同剂型的区分度更高,因此更适用于前期处方的区分及筛选。而据文献报道,猪皮的屏障作用更接近于人皮肤,因此更适用于评价药物透皮性能,建立体内外相关性。

由图2 可知,3 种剂型在不同皮肤中累积透皮量曲线的变化趋势有所不同,这是因为药物主要经角质层细胞间类脂双分子层进入活性表皮。因此,对于角质层较薄的大鼠皮肤,偏水性的凝胶和溶液剂较易透过;而对于角质层较厚的猪皮,脂溶性较大的贴片透皮量相对升高,和其余两剂型的差异性降低。

3.2 剂型的影响

1 溶液在2 种皮肤上24 h 累积透皮量都较高,但图2 显示其在不同皮肤上释放曲线不同,尤其在猪皮上,前期时滞长,释放速率不均匀,起效慢,治疗期窄,同时溶液具有不易定量、不易贮存等缺点,因此往往不是外用剂型的首选。

在大鼠皮肤上,1 凝胶的累积释放量比贴片高,且有统计学意义( 见表2),经释放模型拟合,凝胶中的药物释放更接近Higuchi 模型(Q= 282.4t1/2-177.0R2=0.957 3),贴片中的药物释放曲线更接近于零级模型,更能充分体现外用制剂缓释、长效的优势。结合图2B 所示,贴片在更接近于人皮肤特性的乳猪皮肤上释放量反而偏高,虽然整体曲线没有显著性差异,但稳态透过速率差异性显著。因此,1 贴片更趋近于零级释放、释药更稳定,且角质层越厚,其释放量相对越高,更符合长效稳态镇痛的需求。1 凝胶在鼠皮上释放量较高,在猪皮上虽渗透性能相对变差,但通过调整处方优化其油水分配系数进而提高其渗透性能,也可达到有效治疗浓度。

文献指出,1 虽强效镇痛、不良反应少,但治疗窗窄、维持时间短。1 用于超前镇痛、中晚期癌痛治疗等,推荐剂量为0.1 mg/kg ;用于全麻诱导,推荐剂量为0.1 0.15 mg/kg ;术后镇痛则为0.25 0.3 mg/kg ;且镇痛效果呈剂量依赖性,剂量上限为0.3 mg/kg。因此,倾向于零级释放且易定量的贴片更适合1 的给药,可以通过调整贴片面积,以达到不同治疗效果,用于不同的临床症状。

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