(WO202063370) 免疫组合物及其制备方法与应用

源语言标题
(WO202063370) Immune composition, preparation method therefor, and application thereof
公开号/公开日
WO2020/063370WO2020/063370 / 2020-05-222020-04-02
申请号/申请日
WOCN2019/105716 / 2019-09-12
发明人
MU TINGZHAO PINGXU LONGXIAO YANGJULIEN JEAN-PHILIPPEWU YUEXIE LIANGCHEN XUETINGLIDU QISIA CHARLES DWO YUANCHONG PELE CHOI SINGKLEIN MICHELDU LINSENWU KE;
申请人
BRAVOVAX;
主分类号
IPC分类号
摘要
(WO2020/063370) 本发明提供了一种免疫组合物及其制备方法与应用。 本发明通过原核表达体系或重组腺病毒体系高效表达VZV包膜gE糖蛋白及其gE鞭毛素融合蛋白。 将制得的重组gE蛋白、gE鞭毛素融合蛋白及重组腺病毒载体或其组合物免疫小鼠后可刺激机体产生高水平的gE和VZV特异性抗体滴度及gE和VZV特异性的细胞免疫,具有较好的免疫原性,可开发为新一代的改良型VZV疫苗。 不同于目前上市的减毒活疫苗,利用本发明开发的疫苗不会导致接种者有罹患带状疱疹的风险,并且本发明开发的疫苗比现有的含佐剂gE亚单位带状疱疹疫苗的副作用更低。
地址
代理人
(WO202063370) SHANGHAI CPTO INTELLECTUAL PROPERTY AGENCY CO., LTD ([CN])
代理机构
;
优先权号
2018CN-1131501 2019CN-0571839
主权利要求
(WO2020/063370) 1. 一种免疫组合物,其特征在于,至少包含基于水痘带状疱疹病毒糖蛋白E(简称gE)所得的抗原。 2. 如权利要求1所述的免疫组合物,其特征在于,基于gE的抗原至少包含:(i)gE胞外区或其片段,或者其编码核酸分子;(ii)基于gE的融合蛋白,或者其编码核酸分子;(iii)基于gE的重组载体;(iv)或者上述两种或更多的组合。 3. 如权利要求2所述的免疫组合物,其特征在于,基于gE的融合蛋白包含:gE胞外区或其片段共价偶联至细菌鞭毛素蛋白或其片段,其中所述细菌鞭毛素蛋白或其片段作为TLR-5激动剂。 4. 如权利要求1所述的免疫组合物,其特征在于,gE胞外区具有与SEQ ID NO.1所示氨基酸序列至少90%的同源性。 5. 如权利要求1所述的免疫组合物,其特征在于,基于gE的融合蛋白至少包含:所述鞭毛素蛋白的N端D0-D1区、鞭毛素蛋白的C端D0-D1区,和gE胞外区或其片段。 6. 如权利要求5所述的免疫组合物,其特征在于,gE胞外区或其片段位于所述融合蛋白的N端或C端;或者插入到所述鞭毛素蛋白N端和C端之间。 7. 如权利要求2所述的免疫组合物,其特征在于,所述融合蛋白选自如下任一融合形式: 融合形式1:鞭毛素蛋白N端区-鞭毛素蛋白C端区-gE胞外区或其片段;  融合形式2:gE胞外区或其片段-鞭毛素蛋白N端区-鞭毛素蛋白C端区;  融合形式3:鞭毛素蛋白N端区-gE胞外区或其片段-鞭毛素蛋白C端区;  其中,所述鞭毛素蛋白的N端区或C端区分别直接或者通过连接体与gE胞外区或其片段相连;或,  所述鞭毛素蛋白N端区直接或者通过连接体与鞭毛素蛋白C端区相连。 8. 如权利要求7所述的免疫组合物,其特征在于,所述连接体为1-20个肽键连接的氨基酸。 9. 如权利要求8所述的免疫组合物,其特征在于,所述连接体为连接体I或连接体II;连接体I如SEQ IDNO:4所示;连接体II如SEQ ID NO:7所示。 10. 如权利要求9所述的免疫组合物,其特征在于,所述鞭毛素蛋白的N端区或C端区分别通过连接体II与gE胞外区或其片段进行连接。 11. 如权利要求9所述的免疫组合物,其特征在于,所述鞭毛素蛋白N端区通过连接体I与鞭毛素蛋白C端区相连。 12. 如权利要求3所述的免疫组合物,其特征在于,所述细菌鞭毛素蛋白来自沙门氏菌。 13. 如权利要求12所述的免疫组合物,其特征在于,所述沙门氏菌为鼠伤寒沙门氏菌或肠道沙门氏菌。 14. 如权利要求13所述的免疫组合物,其特征在于,所述鞭毛素蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:29所示。 15. 如权利要求13所述的免疫组合物,其特征在于,所述鞭毛素蛋白N端区为至少与SEQ ID NO:3中第2至176位氨基酸区域有95%同源性的氨基酸序列;所述鞭毛素蛋白C端区为至少与SEQ ID NO:3中第392至495位氨基酸区域有95%同源性的氨基酸序列。 16. 如权利要求13所述的免疫组合物,其特征在于,所述鞭毛素蛋白N端区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示;所述鞭毛素蛋白C端区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。 17. 如权利要求13所述的免疫组合物,其特征在于,所述鞭毛素蛋白N端区为至少与SEQ ID NO:29中第2至180位氨基酸区域有95%同源性的氨基酸序列;所述鞭毛素蛋白C端区为至少与SEQ ID NO:29中第400至506位氨基酸区域有95%同源性的氨基酸序列。 18. 如权利要求13所述的免疫组合物,其特征在于,所述鞭毛素蛋白N端区的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示;所述鞭毛素蛋白C端区的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:31所示。 19. 如权利要求2所述的免疫组合物,其特征在于,所述基于gE的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:8~10、SEQ ID NO:32-34任一所示。 20. 如权利要求2所述的免疫组合物,其特征在于,编码所述gE胞外区或其片段的核酸分子如SEQ ID NO:2,18-19任一所示。 21. 如权利要求2所述的免疫组合物,其特征在于,编码所述基于gE的融合蛋白的核酸分子如SEQ ID NO:11-13、SEQ ID NO:20-26任一所示。 22. 如权利要求2所述的免疫组合物,其特征在于,所述基于gE的重组载体包含如权利要求2-21任一项中所描述的核酸分子。 23. 如权利要求22所述的免疫组合物,其特征在于,所述载体为腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、痘病毒载体、水疱性口炎病毒载体、牛副流感病毒载体、人副流感病毒载体、新城疫病毒载体、仙台病毒载体、麻疹病毒载体、减毒RSV载体、副粘病毒载体、甲型病毒载体(如委内瑞拉马脑炎病毒载、塞姆利基森林病毒载体、辛德比病毒载体)、棒状病毒载体、狂犬病病毒载体、小核糖核酸病毒、慢病毒载体、疱疹病毒载体、或植物来源的病毒用于在植物表达系统中表达。 24. 如权利要求23所述的免疫组合物,其特征在于,所述腺病毒载体为人源腺病毒载体、黑猩猩源腺病毒载体或大猩猩腺病毒载体。 25. 如权利要求24所述的免疫组合物,其特征在于,所述人源腺病毒为5型腺病毒载体(Ad5);所述黑猩猩源腺病毒载体为ChAd68。 26. 如权利要求24所述的免疫组合物,其特征在于,所述腺病毒载体为复制缺陷型腺病毒载体。 27. 如权利要求26所述的免疫组合物,其特征在于,所述腺病毒载体的E1区被删除或功能性缺失从而形成复制缺陷型载体;或E1区和E3区均被删除或功能性缺失。 28. 如权利要求27所述的免疫组合物,其特征在于,所述黑猩猩源腺病毒载体自身的E4区进一步被人5型腺病毒相应的E4区取代以增强载体的功能。 29. 如权利要求22-28任一项所述的免疫组合物,其特征在于,当所述基于gE的重组载体携带编码gE胞外区或其片段的核酸分子时被称为重组腺病毒载体A。 30. 如权利要求29所述的免疫组合物,其特征在于,所述重组腺病毒载体A携带如SEQ ID NO:2,18-19任一所示的核酸分子。 31. 如权利要求29所述的免疫组合物,其特征在于,构建所述重组腺病毒载体A所用的骨架质粒为pAd5-CMV/V5-DEST。 32. 如权利要求29所述的免疫组合物,其特征在于,构建所述重组腺病毒载体A所用的穿梭质粒为pDONR221。 33. 如权利要求29所述的免疫组合物,其特征在于,构建所述的重组腺病毒载体A所用的宿主细胞系包括但不限定于HEK293或PER.C6细胞系。 34. 如权利要求29-33任一项所述的免疫组合物,其特征在于,所述的重组腺病毒载体A由下述方法构建:将测序正确的重组穿梭质粒pDONR221-gE基因-PolyA与病毒骨架质粒pAd5-CMV/V5-DEST进行同源重组,将重组混合物转化至大肠杆菌TOP10感受态细胞中,筛选测序正确的腺病毒载体pAd5-CMV-gE基因-PolyA,将腺病毒载体pAd5-CMV-gE基因-PolyA线性化后转染HEK 293或PER.C6细胞进行包装得到所述的重组腺病毒载体A。 35. 如权利要求22-28任一项所述的免疫组合物,其特征在于,当所述基于gE的重组载体携带编码基于gE的融合蛋白的核酸分子时被称为重组腺病毒载体B。 36. 如权利要求35所述的免疫组合物,其特征在于,所述重组腺病毒载体B携带如SEQ ID NO:11-13,20-26任一所示的核酸分子。 37. 如权利要求35所述的免疫组合物,其特征在于,构建所述的重组腺病毒载体B所用的骨架质粒为pAd5-CMV/V5-DEST。 38. 如权利要求35所述的免疫组合物,其特征在于,构建所述的重组腺病毒载体B所用的穿梭质粒为pDONR221。 39. 如权利要求35所述的免疫组合物,其特征在于,构建所述的重组腺病毒载体B所用的宿主细胞系包括但不限于HEK 293或PER.C6细胞系。 40. 如权利要求35-39任一项所述的免疫组合物,其特征在于,所述的重组腺病毒载体B由下述方法构建:将测序正确的重组穿梭质粒pDONR221-gE-鞭毛素融合蛋白基因-PolyA转化与病毒骨架质粒pAd5-CMV/V5-DEST进行同源重组,将重组混合物转化至大肠杆菌TOP10感受态细胞,筛选测序正确的腺病毒载体pAd5-CMV-gE-鞭毛素融合蛋白基因-PolyA,将腺病毒载体pAd5-CMV-gE-鞭毛素融合蛋白基因-PolyA线性化后转染HEK 293或PER.C6细胞进行包装得到所述的重组腺病毒载体B。 41. 如权利要求1所述的免疫组合物,其特征在于,进一步包含药学上可接受的载体,和/或佐剂,和/或免疫刺激分子。 42. 如权利要求41所述的免疫组合物,其特征在于,所述佐剂包含但不限于:铝盐、水包油乳液或油包水乳液、MF-59、Quil A或其QS21组分、TLR激动剂、壳聚糖、免疫刺激复合物(ISCOMs)或其两种或多种的组合。 43. 如权利要求1-42任一项所述的免疫组合物被用于制备预防和/或治疗由水痘带状疱疹感染的药物组合物中的应用。 44. 如权利要求43所述的应用,其特征在于,所述的免疫组合物用于制备水痘疫苗或带状疱疹疫苗,或用于制备治疗带状疱疹或其愈后神经痛的药物中的应用。 45. 一种联合疫苗,其特征在于,至少包含如权利要求1-42任一项所述的免疫组合物和其他疫苗,所述其它疫苗包含但不限于:流行性腮腺炎、麻疹和风疹疫苗。 46. 如权利要求1-21任一所述免疫组合物中所描述的基于gE的融合蛋白。 47. 如权利要求1-21任一所述免疫组合物中所描述的核酸分子。 48. 如权利要求22-40任一所述免疫组合物中所描述的基于gE的重组载体。 49. 一种分离的宿主细胞,其特征在于,包含如权利要求47所述的核酸分子。 50. 一种制备gE胞外区或其片段,或如权利要求46所述的基于gE的融合蛋白的方法。 51. 如权利要求50所述的方法,其特征在于,通过原核表达系统或者真核表达系统来制备。 52. 如权利要求50所述的方法,其特征在于,所述原核表达为大肠杆菌表达,大肠杆菌为BL21(DE3),表达载体为pET28a;所述gE胞外区的氨基酸序列如SEQ ID NO:35所示,所述gE胞外区的基因序列如SEQ ID NO:36所示;所述基于gE的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:37-39所示;所述基于gE的融合蛋白的基因序列如SEQ ID NO:37-39所示。 53. 如权利要求50所述的方法,其特征在于,其特征在于,所述gE胞外区或其片段通过将如权利要求29-34任一项中所描述的重组腺病毒载体A感染培养Vero细胞获得;所述基于gE的融合蛋白通过将如权利要求35-40任一项中所描述的重组腺病毒载体B感染培养Vero细胞获得。 54. 一种初免-强化免疫方案,其特征在于,使用如权利要求48所述的基于gE的重组载体进行初次免疫,然后用gE胞外区或其片段或者如权利要求46所述的基于gE的融合蛋白进行加强免疫;或者相反地,用gE胞外区或其片段或者如权利要求46所述的基于gE的融合蛋白进行首次免疫,然后用如权利要求48所述的基于gE的重组载体进行加强免疫,其中,使用gE胞外区或其片段进行免疫时可添加如权利要求41-42中所描述的佐剂。 55. 一种初免-强化免疫方案,其特征在于,用如权利要求23所述的基于gE的重组异源载体进行初次免疫,用如权利要求24-40任一项所述的基于gE的重组腺病毒载体进行加强免疫;或者相反地,用如权利要求24-40任一项所述的基于gE的重组腺病毒载体进行初次免疫,用如权利要求23所述的基于gE的重组异源载体进行加强免疫;其中,所述异源载体指非腺病毒载体。 56. 一种初免-强化免疫方案,其特征在于,将如权利要求24-40任一项中所描述的两种不同类型或不同物种的基于gE的重组腺病毒载体分别用作初次免疫或加强免疫,所述重组腺病毒载体携带gE胞外区或基于gE的融合蛋白基因。 57. 一种重组腺病毒载体pAd5-CMV-gE基因-PolyA,其特征在于,gE基因具有如SEQ ID NO:2,18-19任一所示的核酸序列。 58. 一种重组腺病毒载体pAd5-CMV-gE-鞭毛素融合基因-PolyA,其特征在于,gE-鞭毛素融合基因具有如SEQ ID NO:11-13,20-26任一所示的核酸序列。 59. 一种改造的鞭毛素蛋白,其特征在于,鞭毛素蛋白N端区为至少与SEQ ID NO:3中第2至176位氨基酸区域有95%同源性的氨基酸序列;鞭毛素蛋白C端区为至少与SEQ ID NO:3中第392至495位氨基酸区域有95%同源性的氨基酸序列;所述鞭毛素蛋白N端区直接或者通过连接体与鞭毛素蛋白C端区相连。 60. 如权利要求59所述的改造的鞭毛素蛋白,其特征在于,所述连接体为1-20个肽键连接的氨基酸。 61. 如权利要求60所述的改造的鞭毛素蛋白,其特征在于,所述连接体具有如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。 62. 如权利要求59所述的改造的鞭毛素蛋白,其特征在于,所述的N端区的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示;所述的C端区的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:6所示。 63. 如权利要求59所述的改造的鞭毛素蛋白,其特征在于,所述的改造的鞭毛素蛋白具有如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列。 64. 如权利要求59-63任一项所述的改造的鞭毛素蛋白作为免疫佐剂的应用。
法律状态
PENDING
专利类型码
A3A2
国别省市代码
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