四氯虫酰胺原药高效液相色谱分析

2019-01-02

四氯虫酰胺(SYP-9080)是由沈阳化工研究院开发的一种鱼尼丁受体抑制剂类杀虫剂,其对水稻二化螟、稻纵卷叶螟效果优异。水稻是我国最重要的粮食作物之一,水稻二化螟、稻纵卷叶螟等害虫分布范围较广,近年来发生为害趋重,给水稻高产稳产带来较大威胁。水稻生产上常用化学药剂进行防治, 由于这2种害虫发生面积大,尤其是稻纵卷叶螟每年发生世代较多,防治次数多,常规药剂抗性发展较快。SYP-9080的研制成功及市场应用对解决上述问题具有重要作用。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

安捷伦公司1260 Infinity高效液相色谱仪;安捷伦公司G1365C 1260MWD具有可变波长二极管振列检测器;安捷伦公司G1311B 1260 Quat Pump 安捷伦公司G1329B 1260 ALS自动进样器;G1316A 1260 TCC柱温箱; 安捷伦OpenLAB ChemStation色谱工作站; 安捷伦ZORBAX SB- C18 4.6 mm×100 mm×3.5 μm色谱柱; 梅特勒AL204-IC万分之一电子天平;昆山市超声仪器有限公司KQ2200型超声波清洗器。

1.1.2 试剂

乙腈:色谱纯;水:娃哈哈纯净水;磷酸:分析纯;四氯虫酰胺标样:标定纯度为99.5%

1.2 操作条件

色谱柱: 安捷伦ZORBAX SB- C18 4.6 mm×100 mm×3.5 μm;流动相:乙腈-磷酸水(体积比为109010 min8020);检测波长236 nm;流速1.0 mL/min;柱温25 ℃;进样量5 μL;四氯虫酰胺保留时间为12.7 min

1.3 测定步骤

1.3.1 标样溶液的配制

准确地称取四氯虫酰胺标样约0.04 g(精确至0.0002 g)置于校正过的50 mL容量瓶中,先加入20 mL乙腈使待测样品全部溶解后再加入乙腈定容,摇匀备用。

1.3.2 试样溶液的配制

准确地称取四氯虫酰胺原药约0.04 g(精确至0.0002 g)置于校正过的50 mL容量瓶中,先加入20 mL乙腈使待测样品全部溶解后再加入乙腈定容,摇匀备用。

1.3.3 测定

在上述色谱操作条件下,待仪器压力稳定后连续进数针四氯虫酰胺标样溶液, 至相邻2针的峰面积比值相对偏差小于0.5% 且相邻2针标样溶液的主峰保留时间一致,说明该试验条件稳定,可以对原药进行定量分析。然后依次按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定,即可得出四氯虫酰胺标样溶液和试样溶液各自的峰面积及其色谱图,标样溶液和试样溶液的液相色谱图见图12

1.3.4 计算

将测得的标样及试样溶液中的四氯虫酰胺的峰面积分别取平均值,按下列计算公式计算出试样中四氯虫酰胺的质量分数X()

式中:A1为四氯虫酰胺标样溶液中四氯虫酰胺的峰面积平均值,A2为四氯虫酰胺试样溶液中四氯虫酰胺的峰面积平均值,m1为四氯虫酰胺标样的质量(g)m2为四氯虫酰胺试样的质量(g)P为四氯虫酰胺标样的质量分数()

2 结果和讨论

2.1 色谱柱的选择

化合物在色谱系统中的分离很大程度上取决于色谱柱的填料,因此,在色谱方法开发时应根据化合物性质选择合适的色谱柱类型。通过Agilent SB-C18AgilentXDB-C18及资生堂-CN 3个色谱柱进行试验,结果显示资生堂-CN色谱柱峰形较宽且对称性不好, 使得主峰与杂质无法分离;Agilent XDB-C18Agilent SB-C18 2个色谱柱对称性都非常好, 但是Agilent SB-C18Agilent XDBC18的分离度要好一些,使得主峰与杂质峰有较的分离且保留时间也要快一些,所以最终选择Agilent SB-C18色谱柱进行试验。

2.2 检测波长的选择

通过全波长扫描结果确定了四氯虫酰胺在236254 nm均有较强吸收,通过测定主峰与杂质峰的响应值发现在236 nm下, 主峰与杂质峰的响应值比较相近,最终选择236 nm作为检测波长。

2.3 流动相的选择

试验主要选择乙腈-磷酸水合甲醇/磷酸水作为流动相,通过调试流动相比例发现乙腈-水要比甲醇-水分分离度好且保留时间还要快一些,提高了分析效率,所以选择乙腈-水作为流动相。

2.4 溶剂的选择

称取5个四氯虫酰胺样品, 选取二氯甲烷、DMF、乙腈、甲醇、水5种不同极性的溶剂在相同的条件下进行溶解度的测定,结果显示乙腈的溶解度好一些,最终选择乙腈作为溶剂溶解样品。

2.5 溶液稳定性的测定

分别称取5个不同质量浓度的四氯虫酰胺样品,按照四氯虫酰胺液相色谱定量的操作条件进行测定,分别得出5个四氯虫酰胺的响应值。再将5个溶液密封好后室温保存,每隔1 d按照上述色谱条件进行测定,共连续测定7 d 结果显示连续7 d进行测定的四氯虫酰胺的响应值几乎没有变化,说明该溶液稳定性很好。

2.6 方法线性关系的测定

按上述色谱操作条件对四氯虫酰胺含量用外标法进行测定,将四氯虫酰胺标样在400550 mg/L质量浓度范围内配制5个不同质量浓度的溶液,以溶液质量浓度为横坐标, 峰面积为纵坐标制作标准曲线, 结果显示四氯虫酰胺线性方程为y=128 033x+87.971,相关系数为0.9999。说明四氯虫酰胺在400550 mg/L质量浓度范围内线性关系较好。

2.7 方法精密度的测定

称取一定量的四氯虫酰胺样品,按上述色谱条件同一批样品平行测定5次,其平均值为99.4%,标准偏差为0.130,变异系数为0.13%。结果表明该方法对四氯虫酰胺有较低的标准偏差和变异系数。

2.8 方法准确度的测定

采用标准添加法,在已知含量的四氯虫酰胺原药中加入一定量的四氯虫酰胺标样,在上述色谱操作条件下进行测定,平均回收率在99.6%。结果表明该方法对四氯虫酰胺有较好的加标回收率。

3 结论

采用液相色谱法对四氯虫酰胺原药进行了外标定量分析方法,分析试验中通过对仪器、色谱柱、检测波长、溶剂、流动相及进样量的选择,建立了四氯虫酰胺有效成分的质量分数的高效液相色谱分析方法。并且从精密度、准确度、回收率这3个方面进行了分析方法验证,通过分析方法研究,发现对四氯虫酰胺分析具有非常好的线性关系以及较高的准确度和精密度。该方法具有操作简单、快速、分离效果好、灵敏度高的特点,是定量分析四氯虫酰胺的较好方法。

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