(WO2018130158) 耐碳青霉烯类抗生素病菌荧光探针及其合成方法与应用

源语言标题
(WO2018130158) Carbapenem antibiotic-tolerant pathogenic bacterium fluorescent probe and synthesis method and use thereof
公开号/公开日
WO2018130158 WO2018130158 / 2018-07-19 2018-11-22
申请号/申请日
WOCN2018072128 / 2018-01-10
发明人
XIE HEXIN MAO WUYU XIA LINGYING
申请人
EAST CHINA UNIVERSITY OF SCIENCE & TECHNOLOGY
主分类号
IPC分类号
C07D-477/14 C09K-011/06 C12Q-001/06 C12Q-001/34 G01N-021/64
摘要
(WO2018130158)
本发明耐碳青霉烯类抗生素病菌的荧光探针,其结构通式以通式Ⅰ表示。所述荧光探针的合成方法包括以下步骤:(1)化合物3的制备;(2)化合物4的制备;(3)荧光探针CVB-1的制备。将所述荧光探针制成试纸、试剂盒或者检测芯片,可在检测碳青霉烯酶和含有碳青霉烯耐药菌中进行应用。通过荧光探针在荧光强度或颜色变化与否的现象来检测或区分碳青霉烯酶,进而快速检测有碳青霉烯酶表达的致病耐药菌。指导在治疗或临床上合理使用抗生素药物,对不用或少用抗生素药物具有重要的意义。
地址
代理人
(WO2018130158) SHANGHAI ESSEN PATEN & TRADEMARK AGENCY ([CN])
代理机构
优先权号
2017CN-0027441
主权利要求
(WO2018130158)
1. 一类用于检测的耐碳青霉烯类抗生素病菌荧光探针,其中,所述荧光探针的结构通式以通式Ⅰ表示:
 式中:n=1,2。
 式中:
 M为H或金属离子;
 R2、R3、R4、R5、R6独立地选自氢、甲基或乙基; 
 R7选自芳香环、氢或烷烃。
6. 根据权利要求5所述的耐碳青霉烯类抗生素病菌荧光探针,其中,进一步,所述荧光探针结构通式以通式Ⅲ表示:
 其中,R8、R9、R10、R11和R12独立地选自氢、甲基、乙基、卤素、烷氧基、羟基、羧基、磺酸基、氰基、醛基、酯基或聚乙二醇基。
7. 根据权利要求5所述的耐碳青霉烯类抗生素病菌荧光探针,其中,R8、R9、R10、R11和R12还独立地选自羧基或磺酸基的锂、钠、钾、镁或钙盐类衍生物。
8. 根据权利要求5所述的耐碳青霉烯类抗生素病菌荧光探针,其中,所述荧光探针的一具体结构以结构式ⅰ表示:

9. 根据权利要求1所述的耐碳青霉烯类抗生素病菌荧光探针,其中,所述荧光探针能够选择性识别生物标记物碳青霉烯酶,从而起到检测耐碳青霉烯类抗生素病菌的作用。
10. 根据权利要求4所述的耐碳青霉烯类抗生素病菌荧光探针,其中,当dye是萘酰亚胺时,所述荧光探针结构通式以通式Ⅳ表示:
 式中:
 M为H或金属离子;
 R是1-6碳的烷基、饱和羧基、饱和酯基或聚乙二醇基。
11. 根据权利要求1所述的耐碳青霉烯类抗生素病菌荧光探针,其中,在碳青霉烯酶的作用下使β-内酰胺环开环,使整个荧光探针发生结构变化,从而产生光学性质的变化,使所述荧光探针具有用于检测青霉烯酶及其耐药菌的性质,其检测原理表示为:

12. 一种耐碳青霉烯类抗生素病菌的荧光探针的合成方法,其中,包括以下步骤:
 (1)化合物3的制备
 将化合物1、化合物2作为初始反应物,置于反应瓶中,向所述反应瓶中加入N,N-二甲 基甲酰胺(DMF)及三乙胺(TEA),将所得混合物经冷冻-真空-溶解三个循环脱气后,加入醋酸钯(PdOAc2)和三(邻甲基苯基)膦(P(o-Tol)3,再脱气两次; 
 将上述反应体系在氮气氛围下80℃反应16小时,冷却后,加入乙酸乙酯稀释反应体系,将乙酸乙酯相用水洗,再用饱和食盐水洗,用无水硫酸钠干燥、浓缩;
 将所得混合物用石油醚与乙酸乙酯作为流动相经硅胶柱柱层析纯化后得到化合物3;
 (2)化合物4的制备
 将步骤(1)得到的化合物3溶解于N-甲基吡咯烷酮(NMP)与N,N-二甲基甲酰胺的混合液中,N-甲基吡咯烷酮与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为1:3;
 加入二氟化氢铵(NH4·HF2),在室温下反应; 
 反应结束后加入乙酸乙酯稀释上述反应体系,将乙酸乙酯相用水洗,再用饱和食盐水洗,用无水硫酸钠干燥、浓缩;
 将所得混合物用石油醚与乙酸乙酯作为流动相经硅胶柱柱层析纯化后得到化合物4;
 (3)荧光探针的制备
 将步骤(2)得到的化合物4溶解于四氢呋喃中,加入pH为6.0的0.35M磷酸盐缓冲液以及活化锌粉,在20℃下反应1小时;
 将反应液过滤,用色谱乙腈洗涤,用反相C18制备柱纯化,冷冻干燥,得到黑紫色的化合物,即所述的荧光探针。
13. 根据权利要求12所述的耐碳青霉烯类抗生素病菌荧光探针的合成方法,其中,
 所述荧光探针的合成路径如下所示:

14. 根据权利要求12所述的合成方法,其特征在于,所述化合物1为关键中间体,以此为衍生物能够合成其他的荧光探针化合物。
15. 将耐碳青霉烯类抗生素病菌的荧光探针制成试纸、试剂盒或者检测芯片在检测碳青霉烯酶和含有碳青霉烯耐药菌中的应用。
16. 根据权利要求15所述的应用,其特征在于,所述应用包括以下步骤: (1)将耐碳青霉烯类抗生素病菌的荧光探针与待测样品在一定条件下混合,形成具有光学性质的化合物;
 (2)测量具有光学性质的化合物的光学信号变化,包括荧光、紫外吸收或颜色的变化,从而确定待测样品中碳青霉烯酶或者含有碳青霉烯耐药菌的含量或浓度。
法律状态
PENDING
专利类型码
A1 A9
国别省市代码
必须先登录才能执行相关操作!
相关标签
相关文章